蛋白质纯度分析
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检测费用:免费初检,根据客户检测需求以及实验复杂程度进行报价。
蛋白质纯度分析(分子筛/反相色谱)
分子筛是一种包含有精确和单一的微小孔洞的材料,可用于吸附气体或液体。分子筛HPPLC,又称为体积排阻色谱(SEC, size exclusion chromatograghy),小分子量的化合物进入凝胶孔中,滞留时间长;大分子量的化合物不能进入空中,会更早的被洗脱下来。分子筛色谱的优势在于能够处理至少1nmol的目的蛋白,并得到很好的分离效果,分离时间也很短,一般在3个小时以内,同时获得的层析分离峰也更小。
SEC进行蛋白纯化的优点:
1, 可进行缓冲液交换和脱盐。
2, 可分离其他纯化技术难以分离的相似品种(如蛋白片段和低聚物)。
3, 可与多种溶剂相容。
4, 不依赖于蛋白质的任何一种特殊形式进行保留和洗脱。
SEC进行蛋白纯化的缺点:
1, 分离效果严重依赖柱子的填装效果。
2, 蛋白质与介质间有非特异性相互作用,会降低分辨率。
3, 对复杂的蛋白质混合物分辨率低。
4, 为保证足够的分辨率,上样量必须较小。这对沉淀得到的高浓度蛋白质是一个问题。
根据流动相和固定相相对极性不同,液相色谱分为正相色谱和反相色谱。流动相极性大于固定相极性的情况,称为反相色谱。反向色谱具有分辨率高和重复性好的特点,使它在蛋白质及多肽分析领域占据核心地位。对于分子结构比较简单的多肽和某些蛋白质,用 RPLC进行纯化制备是一项高效的手段。反相色谱HPLC主要用于分子量<20,000 Da的小分子量蛋白及蛋白质片段分离。
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