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生物安全性检测之新冠病毒消毒灭活试验(三)

发布时间:2021-04-28 10:23:16 来源:医科毒理安全评价中心 浏览:2283次

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生物安全性检测之新冠病毒消毒灭活试验(三)

生物安全性检测之新冠病毒消毒灭活试验(三)
  破坏微生物的生物学活性和破坏血清中补体的活性称之为灭活。病毒灭活指用热力或化学品如甲醛、丙酮、酚等杀死致病性的病毒、细菌或其他微生物,制成灭活疫苗的处理方法。破坏微生物的生物学活性和破坏血清中补体的活性称之为灭活。今天给大家讲一讲生物安全性检测之新冠病毒消毒灭活试验。
  中和剂审定实验
  1、设计准绳
    医科毒理安全检测中心提示审定实验旨在肯定所选中和剂能否适用于拟停止的细胞感染法病毒灭活实验。中和剂审定实验包括预实验和正式实验,经过预实验肯定消毒剂、中和产物和中和剂等对细胞生长有无影响;经过所设各组实验结果综合剖析,肯定所用中和剂能否对测试消毒剂有良好的中和作用,对实验用病毒和细胞株能否有害或不良影响;中和实验用消毒剂浓度应为正式消毒实验最高浓度,作用时间最短不得少于30s。实验反复3次。
  2、实验分组
    2.1、预实验分组
      在运用细胞感染法停止病毒灭活实验时,对所用中和剂的审定,应停止以下各组预实验,假如中和剂与中和产物对细胞生长无影响,再停止正式实验。
      a)中和剂+细胞→培育:察看所用中和剂对细胞的生长有无影响。
      b)(消毒剂+中和剂)+细胞→培育:察看中和产物溶液对细胞生长有无影响。
      c)消毒剂+细胞→培育:察看消毒剂对细胞生长有无影响。
  在肯定了中和剂与中和产物对细胞生长无影响后,停止正式实验。
    2.2、正式实验分组
      a)中和剂+病毒悬液/病毒载体→接种细胞培育:察看中和剂对病毒有无抑止作用。
      b)(消毒剂/消毒剂载体+中和剂)+病毒悬液/病毒载体→接种细胞培育:察看中和产物,或未被完整中和的残留消毒剂对病毒有无抑止作用或对检测办法有无干扰。
      c)病毒悬液/病毒载体→接种细胞培育:察看病毒能否可致细胞病变,并将该组病毒滴度对数值作为阳性对照值。
        d)未接种病毒的细胞→培育:察看细胞生长能否正常。
    2.3医科毒理安全检测中心提示操作步骤
      2.3.1、悬液法中和剂审定实验
        a)第1组。实验体系中按病毒与中和剂(1︰4体积比例)停止实验。汲取0.2mL病毒混悬液于试管内,置20℃±1℃中5min后,汲取中和剂溶液0.8mL,混合平均。作用10min,以细胞维持液作10倍系列稀释,汲取样液100μL,接种于单层细胞培育板上,每个滴度接种4孔。置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育3-4天。
        b)第2组。实验体系中按病毒与中和产物(1︰4体积比例)停止实验。汲取0.2mL病毒混悬液于试管内,置20℃±1℃中5min后,汲取中和产物溶液0.8mL,混合平均。作用10min,以细胞维持液作10倍系列稀释,汲取样液100μL,接种于单层细胞培育板上,每个滴度接种4孔。置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育3-4天。
        c)第3组。实验体系中按病毒与细胞维持液(1:4体积比例)停止实验。汲取0.2mL病毒混悬液于试管内,置20℃±1℃中5min后,汲取细胞维持液0.8mL,混合平均。作用10min,以细胞维持液作10倍系列稀释,汲取样液100μL,接种于单层细胞培育板上,每个滴度接种4孔。置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育3-4天。
        d)第4组。将实验用细胞,加细胞维持液后置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育。
      2.3.2、载体法中和剂审定实验
        a)第1组。将病毒载体置20℃±1℃中5min后,浸入中和剂1.0mL,作用10min。充沛洗脱,以细胞维持液作10倍系列稀释,汲取样液100μL,接种于单层细胞培育板上,每个滴度接种4孔。置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育3-4天。
        b)第2组。将病毒载体置20℃±1℃中5min后,浸入中和产物溶液(染有消毒剂的载体+中和剂,作用10min)1.0mL,混合平均。充沛洗脱,以细胞维持液作10倍系列稀释,汲取样液100μL,接种于单层细胞培育板上,每个滴度接种4孔。置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育3-4天。
        c)第3组。将病毒载体置20℃±1℃中5min后,浸入细胞维持液1.0mL,充沛洗脱,以细胞维持液作10倍系列稀释,汲取样液100μL,接种于单层细胞培育板上,每个滴度接种4孔。置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育3-4天。
        d)第4组。将实验用细胞,加细胞维持液后置二氧化碳培育箱(36℃±1℃,5%±1%二氧化碳)中培育。

      2.3.3、医科毒理安全检测中心认证告知结果断定
      实验结果契合以下全部条件,所测中和剂可判为合格:
        a)第1、2、3组病毒生长与原接种量相近;
        b)第4组细胞生长正常;
        c)中和剂和中和产物,在正式实验的最高浓度下对细胞生长无影响;
        d)连续3次实验获得合格评价。
  医科毒理安全检测中心是专业生物相容性检测中心,可提供产品的毒理测试、生物学评价检测、生物兼容性检验、生物安全性测试、生物分解率测试、驱蚊药液检测以及病毒灭活灭杀测试等。公司目前工程师50余人, 80% 以上是本科学历;我们合作的实验室通过 CNAS , CMA (EZ),所出具的任何一张报告都有 CNAS,CMA 资质,确保出具的每份报告都具有权威的法律效力。

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